答: 五月技术帖士:在间充质干细胞(MSC)培养中如何减少造血性污染 在MSC培养中,常产生造血细胞污染。在下文中我们给出了一些培养小鼠/人MSC的建议,它们能帮助您减少MSC培养中的巨噬细胞污染,在最初的几次传代即可获得较高纯度的MSC。鉴于长时间的体外培养可能会改变MSC的干细胞性质,我们建议您控制传代次数。
小鼠MSC培养: 在骨髓来源的MSC培养中,常出现巨噬细胞污染,且由于外形相似,二者易被混淆。其主要区别在于细胞大小不同,MSC更大,更扁平,折光率小于巨噬细胞。血液细胞的污染会随着传代而减少。尽管4-6次的传代能够消除大多数的巨噬细胞污染,但是不能做到完全消除。我们的数据显示,小鼠骨髓来源的MSC经6次传代后依然存在CD45阳性细胞的污染。请参考我们的海报以获取更多信息:
为解决该问题,我们建议您注意以下几点: 从骨骼碎片中提取MSC。相比于骨髓,骨骼碎片中MSC的频率更高(CFU-F>35倍),巨噬细胞污染更少(<0.1% P2代)。详情请看海报: 在进行培养之前,使用EasySep®小鼠MSC富集试剂盒(货号#19771)清除造血性细胞。 在低氧环境下培养小鼠MSC。在5%氧气的条件下,小鼠MSC增值更快,其CFU-F数值能达到20%氧气条件下的4倍。详情请见海报。 以上建议能够让您在很少的传代数内获得高纯度的小鼠MSC。 更多细节请参考MesenCult®培养基技术手册:
人MSC培养:
人骨髓来源的MSC培养亦常见造血性细胞污染。在传统的基于血清的MSC扩增培养基中,即使该血清是专为MSC培养设计的,都能使造血性细胞以良好的状态生长。现在,我们向您推荐一种无血清培养基,它能让您在最初的传代中获得纯的人MSC。 MesenCult®-XF培养试剂盒(货号#05429) 如我们的海报所示,MesenCult®-XF培养的MSC在早期的几次传代中鲜有造血性细胞污染(第一代1%,第三代0%)。对比含血清的MesenCult®培养基(第一代69%,第三代8%)优势明显。想了解MesenCult®-XF培养人间充质干细胞的更多优点,请访问以下网址:http://www.stemcell.com/News/97b47/JUNE-Technical-Tip-Increase-the-expansion-rate-of-your-mesenchymal-stem-cells.aspx 有关MesenCult®-XF培养基的更多信息,请参考我们的网站和技术手册。
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